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      PCR反應出現假陽對策

      來源: 上海博湖生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2023/01/05 15:25:24 已瀏覽:
      導讀:PCR反應出現假陽對策

      引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性,需重新設計引物。

      靶序列或擴增產物的交叉污染,這種污染有兩種原因:

      一是整個基因組或大片段的交叉污染,導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:

      ①操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內或濺出離心管外。

      ②除了酶及其他不耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭均應一次性使用。

      ③必要時,在加標本前,反應管和試劑用紫外線照射,以破壞存在的核酸。

      二是空氣中的小片段核酸污染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性??苫ハ嗥唇?,與引物互補后,可擴增出PCR產物,而導致假陽性的產生,可用巢式PCR方法來減輕或消除。

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